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1. 我該如(ru)何處(chu)理和保存多肽？

凍干(gan)粉形式的多肽(tai)(tai)，經密(mi)封(feng)包裝可在常(chang)溫條件(jian)下穩定運(yun)輸，溶解狀態的多肽(tai)(tai)不宜長期保存。

多肽保存指南：需(xu)要長期(qi)保存的多肽，應以凍干粉形式(shi)存放在含有干燥劑(ji)的密封容器內，置(zhi)于-20°C保存(cun)(cun)，-80°C效果(guo)更好(hao)，可(ke)以(yi)最大限度地避(bi)免多肽(tai)降(jiang)解。這種儲存(cun)(cun)方式可(ke)以(yi)使(shi)多肽(tai)可(ke)保存(cun)(cun)數(shu)年，避(bi)免了被細(xi)菌降(jiang)解和氧化，也可(ke)以(yi)避(bi)免二級結構的形成。

打開包裝： 在(zai)打開(kai)包裝和稱重前，請先(xian)將多肽(tai)在(zai)干燥(zao)器中平衡至室溫。因多肽(tai)往往具有(you)吸濕性(xing)，未(wei)經平衡到(dao)室溫的多肽(tai)在(zai)打開(kai)蓋子后(hou)易凝結(jie)，從而降低了多肽(tai)產品的穩定性(xing)。

稱重： 迅速稱取您所需(xu)的多肽(tai)，并將剩余多肽(tai)繼續儲(chu)存在-20°C或更(geng)低溫度。與其他多肽(tai)相比，含有(you)半胱氨(an)(an)酸(suan)、蛋氨(an)(an)酸(suan)、色氨(an)(an)酸(suan)、天冬酰(xian)胺、谷氨(an)(an)酰(xian)胺和(he)谷氨(an)(an)酸(suan)N -末端的多肽(tai)保存期更(geng)短。

2. 如何溶解多肽？

多(duo)(duo)肽(tai)的溶(rong)(rong)(rong)(rong)解性(xing)(xing)(xing)(xing)很大程度上取決于(yu)多(duo)(duo)肽(tai)的極性(xing)(xing)(xing)(xing)。酸(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)的蛋白溶(rong)(rong)(rong)(rong)解于(yu)堿性(xing)(xing)(xing)(xing)溶(rong)(rong)(rong)(rong)液，而堿性(xing)(xing)(xing)(xing)蛋白可溶(rong)(rong)(rong)(rong)解于(yu)酸(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)溶(rong)(rong)(rong)(rong)液，含有大量不帶電荷(he)的極性(xing)(xing)(xing)(xing)氨(an)基酸(suan)殘基或疏(shu)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)氨(an)基酸(suan)的疏(shu)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)多(duo)(duo)肽(tai)和中性(xing)(xing)(xing)(xing)多(duo)(duo)肽(tai)可先溶(rong)(rong)(rong)(rong)解于(yu)少量有機溶(rong)(rong)(rong)(rong)劑中，如DMSO、DMF、醋(cu)酸、乙腈(jing)、甲醇、丙醇或異(yi)丙醇，然后加水（蒸餾水）稀釋。含(han)有甲硫(liu)氨(an)酸或半(ban)胱氨(an)酸的(de)多肽不能用(yong)DMSO溶(rong)解，因為DMSO可能造成側鏈氧化。

多肽溶解(jie)測試： 在多肽溶(rong)解之前先取小(xiao)部分進(jin)行(xing)多肽溶(rong)解測(ce)試，您需要測(ce)試幾種不同的(de)溶(rong)劑，直到找到最適當的(de)一(yi)種。超聲處理有助于打碎顆粒并增加(jia)溶(rong)解度。（注意: 超聲處理(li)會引起(qi)溶(rong)液發熱和(he)多肽降解。）

將每個酸(suan)(suan)性(xing)氨(an)基酸(suan)(suan)賦(fu)值(zhi)為－1，包(bao)括(kuo)天冬氨(an)(an)酸(suan)（D）、谷氨(an)(an)酸(suan)（E）、以及羧基(ji)末(mo)端-COOH。每個(ge)堿性(xing)氨(an)(an)基(ji)酸(suan)賦值為(wei)＋1，包(bao)括(kuo)精氨(an)(an)酸(suan)（R）、賴氨(an)(an)酸(suan)（K）、組氨(an)(an)酸(suan)（H）以及氨(an)(an)基(ji)末(mo)端-NH2。然后計算(suan)整個(ge)多肽的(de)電荷數(shu)。

如(ru)果整段肽(tai)所帶電(dian)荷是(shi)陽性的(de)，說明該肽(tai)是(shi)堿性的(de)。可(ke)先(xian)嘗(chang)試(shi)用蒸餾水來(lai)溶解；如(ru)果不溶于水，接著(zhu)嘗(chang)試(shi)用少量10%-25%醋酸溶(rong)解(jie)，如果仍然(ran)失敗的話，添加一些TFA（10-50微升(sheng)）來增(zeng)溶(rong)，然(ran)后用水稀(xi)釋至理想濃度(du)。

如果(guo)整段肽(tai)(tai)所帶電荷是(shi)(shi)陰性(xing)的，說明該肽(tai)(tai)是(shi)(shi)酸(suan)性(xing)的。酸(suan)性(xing)的多肽(tai)(tai)可以嘗試用PBS（PH 7.4）來溶解，如果不溶的話，添加少量的堿性溶劑，如0.1 M的碳酸氫銨，然后加水稀釋至理想濃度。含有游離半胱氨酸的多肽應溶于脫氣的酸性緩沖液中，因為當PH值大于7時，巰基會被迅速化成二硫化物(wu)。

如果整段肽(tai)電荷(he)是(shi)零(ling)，說明(ming)肽(tai)是(shi)中性(xing)的。中性(xing)肽(tai)通(tong)常溶于有機溶劑。首(shou)先，嘗試添加少(shao)量(liang)乙腈、甲(jia)醇或異丙醇。對(dui)于高度疏(shu)水(shui)的多肽(tai)，可(ke)使(shi)用少(shao)量(liang)的二(er)甲(jia)基亞砜溶解，然后用水(shui)稀釋至理想濃度。對(dui)于含有自(zi)由半胱氨酸的肽(tai)，需使(shi)用DMF而(er)不是DMSO。對(dui)于有聚集傾向的肽，可添加(jia)6M鹽酸胍或8M尿素，然后進(jin)行必要的稀(xi)釋。

為(wei)了防(fang)止(zhi)或盡量減少多(duo)肽降解，請將(jiang)多(duo)肽以凍干粉(fen)形式保(bao)存在-20°C，-80°C更佳。如(ru)果需要(yao)保存溶(rong)液肽，最(zui)好分成小樣(yang)存放，以(yi)避免反復(fu)凍(dong)融。一份樣(yang)品融凍(dong)后未用完，應扔掉。細(xi)菌(jun)(jun)降解有時會成為溶(rong)液肽的麻煩，所以(yi)請將肽溶(rong)于無菌(jun)(jun)水或(huo)肽溶(rong)液過濾除(chu)菌(jun)(jun)。

堿性氨基酸: K, R, H, N-terminus
酸(suan)性氨基(ji)酸(suan): D, E, C-terminus
極性中性氨基酸: F, I, L, M, V, W, Y
非極性疏(shu)水氨基酸: G, A, S, T, C, N, Q, P, 乙酰基，酰胺基

舉例說明：
RKDEFILGASRHD: (+5) + (-4) = +1 認為是堿性多肽，見步驟2
EKDEFILGASEHR: (+4) + (-5) = -1 認為是酸性多肽，見步驟3
AKDEFILGASEHR: (+4) + (-4) = 0 認為是中性(xing)多肽，見步驟4

3.一個(ge)肽段是否可溶能預測嗎？

我們無法(fa)通過研究多肽(tai)的結(jie)構來預測其(qi)在(zai)水中的溶解度(du)。然而(er)，賴氨酸的ε-氨(an)基和精氨(an)酸的(de)胍(gua)通(tong)常(chang)有助于預測溶解度(du)，尤其是短肽(tai)。與此(ci)相反，含(han)有天門冬氨(an)酸和谷氨(an)酸的(de)酸性(xing)(xing)肽(tai)往(wang)往(wang)是不易溶于水的(de)，但易溶于稀(xi)氨(an)水或堿性(xing)(xing)緩沖液。

4. 如(ru)何選擇適合自(zi)己研究(jiu)的多肽純度(du)？

粗品肽(tai)不推(tui)薦(jian)用于生物實驗。粗肽(tai)可能含有(you)大量的非肽(tai)類(lei)雜質，如殘留的有(you)機溶(rong)劑、清除劑、TFA和(he)其他(ta)(ta)不完整肽(tai)。TFA不能被(bei)完全消除，通(tong)常交付的(de)(de)(de)肽(tai)以TFA鹽(yan)(yan)(yan)(yan)的(de)(de)(de)形式存在(zai)。如果(guo)殘留的(de)(de)(de)TFA影響您(nin)的(de)(de)(de)實(shi)驗，我們推薦其他(ta)(ta)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)形式，如醋酸鹽(yan)(yan)(yan)(yan)和(he)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)酸鹽(yan)(yan)(yan)(yan)等(deng)。這些鹽(yan)(yan)(yan)(yan)通(tong)常比常規TFA鹽(yan)(yan)(yan)(yan)貴20-30%以上(shang)。這是由于在(zai)轉化過(guo)程中(zhong)出現更(geng)多的(de)(de)(de)肽(tai)損失和(he)需要更(geng)多的(de)(de)(de)原(yuan)材料。

建議(yi)對各種項目采用以下級別的肽純(chun)度：

>70% 肽純度

肽微陣列(lie)

作為制備抗體的抗原(yuan)

層(ceng)析法

酶聯(lian)免疫吸附試(shi)驗檢測抗血清滴度

>80% 肽純度

免疫印跡(ji)法(fa)（非(fei)定量）

酶底物肽（非定量）

封閉肽(tai)（非定量）

親和(he)純化

磷(lin)酸化檢(jian)測

蛋(dan)白電泳的應用和免疫細胞化學(xue)

>95% 肽純度

標準酶聯免疫(yi)吸附試驗和RIA（定量）

受體配體相互作(zuo)用（定量）

體內、體外

生物學測定

酶的研究(jiu)和阻斷實驗（定量）

NMR研究

質譜分析

其(qi)他定(ding)量(liang)檢測(ce)

>98% 肽純度

SAR研究

臨床試驗

APIs(藥物活性成分)

工業(ye)品

X-ray晶體研究

其他敏(min)感的(de)實驗：酶與底物、受(shou)體與配體相互作用、阻斷和(he)競爭實驗

5. 什么是多(duo)肽的純度？

多肽的純度是(shi)指(zhi)HPLC方法(fa)在(zai)214nm處檢測到的(de)(de)(de)目標(biao)多肽的(de)(de)(de)含量(liang)(214nm是肽鏈的(de)(de)(de)吸收波長)，紫外(wai)分(fen)光光度計(ji)檢測不(bu)(bu)到水和殘留的(de)(de)(de)鹽(yan)不(bu)(bu)。可發現其他的(de)(de)(de)雜質包(bao)括：缺失(shi)序列(lie)（缺失(shi)了(le)一個或多個氨(an)基酸殘基的(de)(de)(de)靶序列(lie)），截(jie)斷(duan)序列(lie)（加帽過程中產(chan)生的(de)(de)(de)序列(lie)）脫(tuo)保(bao)護(hu)不(bu)(bu)完全序列(lie)（產(chan)生于整個合成過程或最后的(de)(de)(de)裂解過程）。

多肽純化不涉及水和鹽。HPLC純化會(hui)產生少(shao)量(liang)的TFA，如(ru)：游離的氨基末端和其他(ta)側(ce)鏈如(ru)Arg、Lys、His都可生成少(shao)量(liang)TFA雜質。通(tong)常(chang)交付的多肽多含有微(wei)量(liang)TFA和殘留(liu)水(shui)。即使處于凍(dong)干狀態，水(shui)也會(hui)因(yin)共價結合(he)的能力不同而不同程(cheng)度(du)地存(cun)在著。

純化前(qian)的(de)(de)多(duo)肽中包(bao)含的(de)(de)雜質包(bao)括多(duo)肽和(he)非多(duo)肽物質, 純化后的多(duo)肽中包含的雜質除了TFA鹽，大多(duo)數為序列(lie)被修改(gai)的多(duo)肽。

缺失了(le)一個(ge)或(huo)多個(ge)氨基酸殘基的靶序列

為避免缺(que)失序列的產(chan)生(sheng)而進行的加帽操作(zuo)，截(jie)斷序列即產(chan)生(sheng)于(yu)加帽過程(cheng)中

產生于整(zheng)個合成過程或最后(hou)的裂(lie)解(jie)過程

保護(hu)基重(zhong)新附著在多肽的其他(ta)位置

6. 什么是肽凈含(han)量？

肽(tai)凈含(han)量(liang)(liang)不(bu)同(tong)于多肽(tai)純度。肽(tai)凈含(han)量(liang)(liang)是指與非肽(tai)物質（主(zhu)要(yao)為抗(kang)衡(heng)離子和(he)(he)水(shui)）相比的多肽(tai)量(liang)(liang)。可通過氨基酸(suan)分析來確定(ding)肽(tai)凈含(han)量(liang)(liang)。通常(chang)，親水(shui)性多肽(tai)即使在嚴(yan)格(ge)的凍(dong)干狀態下(xia)，也會吸收微量(liang)(liang)的水(shui)。因純化和(he)(he)凍(dong)干工藝，會導致不(bu)同(tong)批(pi)次(ci)的肽(tai)凈含(han)量(liang)(liang)有所不(bu)同(tong)。

7. 如何合成多肽？

不同于天然蛋白質(zhi)的合(he)成，人工合(he)成的方向是從C到N端。澤溪源的(de)(de)(de)(de)多肽合(he)成是(shi)基(ji)于PeptideSyn技術平臺的(de)(de)(de)(de)Fmoc或t-Boc法的(de)(de)(de)(de)多肽合(he)成。具體(ti)(ti)合(he)成由下列(lie)幾個循(xun)環組成：①去(qu)(qu)保(bao)護(hu)：Fmoc保(bao)護(hu)的(de)(de)(de)(de)柱(zhu)子和(he)單體(ti)(ti)必(bi)須用piperidine去(qu)(qu)除氨(an)基(ji)的(de)(de)(de)(de)保(bao)護(hu)基(ji)團。②激(ji)活(huo)和(he)交聯(lian)：下一個氨(an)基(ji)酸的(de)(de)(de)(de)羧基(ji)被(bei)一種活(huo)化(hua)劑所(suo)活(huo)化(hua)。活(huo)化(hua)的(de)(de)(de)(de)單體(ti)(ti)與游離的(de)(de)(de)(de)氨(an)基(ji)反(fan)(fan)應(ying)交聯(lian)，形(xing)成肽鍵。③循(xun)環：這兩(liang)步反(fan)(fan)應(ying)反(fan)(fan)復循(xun)環直到合(he)成完成。接(jie)著(zhu)合(he)成的(de)(de)(de)(de)肽從樹(shu)脂切(qie)割(ge)和(he)去(qu)(qu)保(bao)護(hu)。最后被(bei)沉(chen)淀、洗(xi)脫、冷(leng)凍干燥。

8.

Peptides are usually delivered as TFA salts. If residual TFA would be problematic for your experiment, we recommend other salt forms such as acetate and hydrochloride. These salt forms are usually 20-30% more expensive than the regular TFA salt because of the peptide loss that takes place during the salt conversion and the greater amounts of raw materials required.

9. 如何(he)對(dui)合(he)成的多肽進行質檢？

公司對客戶(hu)提供的所有材料均嚴格保密。我(wo)們總(zong)是在發送產品時(shi)(shi)，同時(shi)(shi)免(mian)費提供HPLC和MS檢(jian)測(ce)(ce)結果(guo)。公司所有多肽(tai)(tai)(tai)均(jun)采用反相色譜(pu)法(fa)純化。以質譜(pu)法(fa)測(ce)(ce)定(ding)肽(tai)(tai)(tai)的(de)分(fen)子量來確定(ding)產品是否(fou)正確，MS檢(jian)測(ce)(ce)結果(guo)還(huan)可(ke)顯(xian)示大部(bu)份(fen)的(de)主要(yao)雜質。如(ru)果(guo)必要(yao)，還(huan)可(ke)提供(gong)肽(tai)(tai)(tai)凈含量檢(jian)測(ce)(ce)，如(ru)氨(an)(an)基酸分(fen)析(xi)或元素分(fen)析(xi)。這些(xie)方法(fa)可(ke)以證實多肽(tai)(tai)(tai)的(de)氨(an)(an)基酸組成，他們(men)均(jun)可(ke)作為(wei)多肽(tai)(tai)(tai)確認的(de)補充方法(fa)。所有交付的(de)肽(tai)(tai)(tai)均(jun)達到了客戶(hu)要(yao)求的(de)純度。沒有達到純度要(yao)求的(de)那些(xie)多肽(tai)(tai)(tai)均(jun)被丟棄。當然如(ru)果(guo)客戶(hu)需要(yao)，也可(ke)以發(fa)送(song)給他們(men)。

10. 公司對合成的多(duo)肽提(ti)供分裝(zhuang)服務(wu)嗎？

根據(ju)要求(qiu)，公司可以將您的(de)(de)部分或全(quan)部訂單，免費分裝(zhuang)成(cheng)小份。由于少量分裝(zhuang)可以避免多次(ci)反復凍融(rong)，減少容(rong)器的(de)(de)開蓋和閉合的(de)(de)次(ci)數，減少處理不(bu)當(dang)或細菌污染的(de)(de)機(ji)會，讓(rang)您的(de)(de)多肽更加穩定。

11. 什么是原料藥（APIs）、目錄肽（catalog peptides）、合成肽（custom peptide synthesis）？

原(yuan)料藥(yao)（活(huo)性藥(yao)物(wu)成(cheng)分）是(shi)醫藥(yao)中具有藥(yao)物(wu)活(huo)性的(de)成(cheng)分，如縮宮素、恩夫韋地等。目錄肽(tai)是(shi)市場上銷售的(de)多肽(tai)，他們通(tong)常(chang)以較高的(de)純度水平批(pi)量生(sheng)產。合成(cheng)肽(tai)通(tong)常(chang)是(shi)根據(ju)客戶的(de)具體要求定(ding)(ding)制，如特定(ding)(ding)序列、修飾、不(bu)(bu)同純度、不(bu)(bu)同長度等要求。公司提供的(de)API肽合成周期為2-3周。

12. 單(dan)個訂單(dan)的最少合(he)成(cheng)量是多少？

公司提(ti)供的單(dan)條(tiao)訂(ding)單(dan)的最(zui)少合成量是1mg，用于(yu)研究的多肽(tai)和GMP藥(yao)物肽(tai)合成(cheng)的量沒(mei)有上限。

13. 能夠合成的(de)多(duo)肽的(de)最大長度(du)是多(duo)少？

我們成功合成了長度為120個氨基酸的(de)多肽。 50個氨基酸長(chang)度的(de)多肽屬于常規合成。

14. 什么是固(gu)相合成？

氯甲基聚苯乙烯樹脂作(zuo)為不溶性的(de)固(gu)相載體(ti)，首先將一(yi)(yi)個氨基被(bei)封閉基團保(bao)護的(de)氨基酸(suan)共(gong)價連(lian)接(jie)在(zai)固(gu)相載體(ti)上(shang)。在(zai)三氟乙酸(suan)的(de)作(zuo)用下(xia)，脫掉氨基的(de)保(bao)護基，這樣第(di)一(yi)(yi)個氨基酸(suan)就接(jie)到了(le)固(gu)相載體(ti)上(shang)了(le)。然(ran)后氨基被(bei)封閉的(de)第(di)二個氨基酸(suan)的(de)羧(suo)基通過(guo)N,Nˊ-二環己基(ji)碳二亞胺（DCC，Dicyclohexylcarbodiimide）活(huo)化，羧基(ji)被DCC活(huo)化的第二個氨基(ji)酸(suan)再與已(yi)接(jie)在(zai)固(gu)相載體的第一(yi)個氨基(ji)酸(suan)的氨基(ji)反應形成(cheng)(cheng)肽(tai)鍵(jian)，形成(cheng)(cheng)二肽(tai)。重復上述(shu)肽(tai)鍵(jian)形成(cheng)(cheng)反應，使肽(tai)鏈從C端向N端延長，直至達到所需要的肽(tai)鏈長度。

15. 什么(me)是樹(shu)脂(zhi)和(he)鏈接劑?

樹(shu)脂是(shi)一(yi)種(zhong)以(yi)聚(ju)(ju)(ju)(ju)苯乙(yi)烯等為(wei)基質的(de)(de)聚(ju)(ju)(ju)(ju)合物支架(jia)，是(shi)人工合成的(de)(de)固(gu)相介質。不(bu)同(tong)的(de)(de)樹(shu)脂有(you)不(bu)同(tong)的(de)(de)特(te)性(xing)。如聚(ju)(ju)(ju)(ju)乙(yi)二(er)醇在非(fei)極(ji)性(xing)溶劑(ji)中膨脹，而聚(ju)(ju)(ju)(ju)苯乙(yi)烯在極(ji)性(xing)和非(fei)極(ji)性(xing)溶劑(ji)中都(dou)膨脹。鏈接(jie)(jie)劑(ji)是(shi)鏈接(jie)(jie)樹(shu)脂支架(jia)與基質的(de)(de)中間結構(gou)。不(bu)同(tong)的(de)(de)鏈接(jie)(jie)劑(ji)，適用(yong)于基質中的(de)(de)不(bu)同(tong)功能團。

16. 什么(me)是保護基(ji)團？

保護基團是能夠結合(he)功(gong)能基團并阻斷其反應活性的片段。有些(xie)是acid-labile保(bao)護基(ji)團(tuan)(tuan)，如Boc和(he)(he)tert-Bu酯(zhi)(zhi)類物質。有(you)些是base labile保(bao)護基(ji)團(tuan)(tuan)，如Fmoc和(he)(he)Fm酯(zhi)(zhi)類物質。還有(you)一些是fluoride-labile保(bao)護基(ji)團(tuan)(tuan)，如Tmsec和(he)(he)Tmse酯(zhi)(zhi)類物質。為確保(bao)羧基(ji)和(he)(he)氨基(ji)間的有(you)效耦合，保(bao)護基(ji)團(tuan)(tuan)應(ying)該易于被附加和(he)(he)去保(bao)護，且(qie)不影響其它(ta)肽段。

17. 為什么要進(jin)行N端乙(yi)酰化，C端酰胺化修飾(shi)？

化學合(he)成的肽往往攜帶游離(li)的氨基和游離(li)的羧基。而肽的序(xu)列(lie)往往代表了(le)母本(ben)蛋(dan)白的序(xu)列(lie)，為了(le)與母本(ben)蛋(dan)白更為接(jie)近(jin)，肽末(mo)端往往需要封(feng)閉，即(ji)N端(duan)乙酰化(hua)(hua)和(he)C端(duan)酰胺化(hua)(hua)，這些修飾會減少多肽的(de)總(zong)電(dian)荷，降低(di)多肽的(de)溶(rong)解度，也可以使肽模(mo)擬(ni)它(ta)在(zai)母本蛋白中α氨基(ji)和(he)羧基(ji)的(de)原(yuan)始狀態。

如果需(xu)要(yao)對N端進(jin)行乙(yi)酰化(hua)修(xiu)(xiu)(xiu)飾或對C端進(jin)行酰胺化(hua)修(xiu)(xiu)(xiu)飾，請(qing)在下(xia)單(dan)時明(ming)確(que)。合(he)成一(yi)旦結束(shu)，則不能再(zai)進(jin)行修(xiu)(xiu)(xiu)改。

18. 熒光(guang)標(biao)記時，肽和修飾標(biao)記的染料之(zhi)間(jian)需要加一個間(jian)隔嗎？

多數染(ran)料屬(shu)于大(da)(da)分(fen)子量芳香族氨(an)基酸，在多肽中引入這一(yi)(yi)類(lei)大(da)(da)型分(fen)子，為了(le)避(bi)免多肽與標簽之間(jian)發生(sheng)相(xiang)互作(zuo)用，維持蛋白的(de)構象及其生(sheng)物學(xue)活性，我們推薦(jian)引入一(yi)(yi)個(ge)可(ke)彎曲的(de)間(jian)隔區(qu)，比如Ahx, Ahx是一(yi)個(ge)含有6碳分子的環狀結構，可(ke)以維持(chi)熒光標簽的穩定性。否則(ze)，FITC很容易結合(he)多肽(tai)序列(lie)中的半胱氨(an)酸(suan)(suan)殘基或者賴(lai)氨(an)酸(suan)(suan)殘基。

通(tong)常情況下，生物素(su)、FITC一(yi)類的(de)(de)染料既可以標記在(zai)(zai)蛋白的(de)(de)氨基(ji)(ji)端(duan)也(ye)可以標記在(zai)(zai)蛋白的(de)(de)羧基(ji)(ji)端(duan)。然而，為了在(zai)(zai)最(zui)短時間內，最(zui)便捷又高效地合成(cheng)多(duo)肽(tai)，澤(ze)溪源推(tui)薦客戶選擇(ze)標記在(zai)(zai)氨基(ji)(ji)端(duan)。因(yin)為一(yi)個多(duo)肽(tai)的(de)(de)合成(cheng)往往是從(cong)羧基(ji)(ji)端(duan)開始(shi)的(de)(de)，這(zhe)樣一(yi)來(lai)，氨基(ji)(ji)端(duan)的(de)(de)修(xiu)飾便成(cheng)為最(zui)后一(yi)個環(huan)節，不需要(yao)再進行(xing)特(te)別的(de)(de)結合作用。反之，羧基(ji)(ji)端(duan)修(xiu)飾需要(yao)額外的(de)(de)環(huan)節，因(yin)此過程更加復雜。

19. 怎樣計算多(duo)肽的濃度(du)？

Peptide Purity is the percentage target sequence amongst the total quantity of peptides. Because peptide bond formation in synthesis is not 100% efficient, not all polypeptide chains are the target sequence. Some chains may not go to completion, or amino acids may not properly bond on certain chains. These deleted sequences make up a certain percentage of peptides in your mixture. We analyze and purify crude peptides using Reverse Phase HPLC in conjunction with Mass Spec Analysis to attain the desired target sequence purity.

After your peptide is purified and lyophilized, the white peptide powder will contain some non-peptide components such as water, absorbed solvents, counter ions and salts. Net peptide content consists of the actual percentage weight of peptide in your final product. This number varies, anywhere from 50 to 90 percent, depending on the purity, sequence and method of synthesis and purification. When calculating the concentration of peptide solution for biological assays or other sensitive peptide experiments, it is essential that you account for peptide content. Peptide concentrations can be determined by subtracting away the non-peptide weight determining the volume of solvent in which to dissolve. For example, when using 1mg of final product to make a 1mg/ml solution of peptide with a content of 80%, you would use 800ul of solvent instead of 1000ul.

Peptide content is not an indication of peptide purity; these are two measurements. Purity is determined by HPLC and indicates the presence/absence of contaminating peptides with undesired sequences. Net peptide content only gives information on the percent of total peptide versus total non-peptide components independently of the presence of multiple peptides. Net peptide content is accurately found by performing amino acid analysis or UV spectrophotometry.

It is difficult to determine the actual peptide concentration based on the weight of the lyophilized peptide. Lyophilized peptides may contain 10-70% water and salts by weight. More hydrophilic peptides generally contain more bound water and salts compared to hydrophobic peptides.

If the peptide has a chromophore in the sequence (W or Y residues), peptide concentration can be conveniently determined based on the extinction coefficient of these residues.

The following steps can be used for the calculations:

Molar extinction coefficients of chromophoric residues at 280 nm at neutral pH using a 1-cm cell:

Tryptophan 5560 AU/mmole/ml

Tyrosine 1200 AU/mmole/ml

The extinction coefficient of each chromophore in the peptide sequence is generally considered to be additive, that is, the overall molar extinction coefficient of the peptide depends on the types and number of these choromophoric residues in the sequence.

Calculations: mg peptide per ml = (A280 x DF x MW) / e, where A280 is the actual absorbance of the solution at 280 nm in a 1-cm cell, DF is the dilution factor, MW is the molecular weight of the peptide and e is the molar extinction coefficient of each chromophore at 280 nm

Hypothetical example: A 50X diluted solution of a peptide with the sequence GRKKRRQRRRPPQQ (MW = 1847) reads 0.5 AU at 280 nm in a 1-cm cell. To calculate the original peptide concentration in the stock peptide solution:

Mg peptide/ml = (0.5AU x 50 x 1847 mg/mmole) / [(1 x 5560) + (2 x 1200)] AU/mmole/ml = 5.8

Cautions:

Any absorbance calculation assumes that the peptide is unfolded and the chromophores are exposed, which is usually the case in short, soluble peptides. If there are doubts about the solubility or the folding of the peptide, it is advisable to make the measurement under denaturing conditions (e.g., 6M GdnHCl or 8M urea). Obviously, these peptide solutions will be rendered useless, unless the denaturants are removed.

If the sequence does not have Trp or Tyr, the only practical option is to do amino acid analysis.

20. 如何利用SDS-PAGE法去(qu)除小的多(duo)肽？

您(nin)的樣品(pin)中是(shi)否含(han)有<20 kDa的目標蛋白？ 請點擊下載關于 。Tricine-SDS-PAGE方案(an)其中包括考瑪斯(si)亮(liang)藍染色(se)和(he)電泳的實驗方法(fa)。

Tricine-SDS-PAGE被普遍用于分離分子量為1-100 kDa的蛋白，它被認為是分辨<30 kDa蛋白的首選電泳系統。

21. 如(ru)何將(jiang)多肽溶解(jie)在(zai)DMSO中？

二甲基(ji)亞砜(feng)（DMSO）是一種(zhong)含硫有機化合物，分子式為(wei)(wei)(wei)（CH3)2SO，常溫下為(wei)(wei)(wei)無色無臭的透明液體(ti)。DMSO作為(wei)(wei)(wei)冷(leng)凍(dong)保護劑經常應(ying)用于細胞庫(ku)。在細胞冷(leng)凍(dong)過程中，DMSO可防(fang)止胞內(nei)/胞外晶體(ti)的形(xing)成，其工作濃度為(wei)(wei)(wei)10%。DMSO通常可與鹽或(huo)血清白蛋(dan)白結(jie)合。

疏水性(xing)多肽(tai)可以很容(rong)易地溶解在DMSO中(zhong)。但DMSO可(ke)增加細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)通透性(xing)(xing)，若多肽溶解于DMSO中(zhong)則(ze)會(hui)對(dui)(dui)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)產(chan)生毒(du)性(xing)(xing)作用。高(gao)濃度(du)的(de)DMSO絕不可(ke)應(ying)用于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)中(zhong)。濃度(du)為5%的(de)DMSO即(ji)可(ke)讓細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)溶解。大多數細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)株可(ke)以(yi)(yi)容忍(ren)0.5% DMSO，少許可(ke)以(yi)(yi)容忍(ren)1%的(de)濃度(du)，而(er)(er)不表現(xian)出嚴(yan)重的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)毒(du)性(xing)(xing)。然(ran)而(er)(er)原代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)對(dui)(dui)其更敏感。所以(yi)(yi)如果(guo)是用原代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)做劑量/反應(ying)曲線(可(ke)行性(xing)(xing))，其濃度(du)應(ying)低于0.1%。

對于某些疏水性非常高的(de)多肽，可先嘗試(shi)將其(qi)溶(rong)解在(zai)少量的(de)DMSO(30-50ul,100%)中(zhong)(zhong)，然后慢慢 (一滴(di)一滴(di)地)將其(qi)添加(jia)到(dao)(dao)不斷攪拌(ban)的(de)水(shui)溶液如PBS或其(qi)他(ta)想要的(de)緩(huan)沖液中(zhong)(zhong)，直(zhi)至(zhi)理想濃度。如果滴(di)加(jia)過程(cheng)中(zhong)(zhong)，肽(tai)溶液開始變渾(hun)濁，說(shuo)明已經達到(dao)(dao)了溶解極限。另外，超聲波有助于(yu)多肽(tai)溶解。

經驗:

對幾乎所有的細胞(bao)來說，濃度(du)為0.1%DMSO是安(an)全的。

廣泛被用于細胞培養的(de)DMSO終濃度為0.5%，不會引起細胞毒性(xing)。

雖(sui)然對(dui)部份細胞來說，1%DMSO也不會產生(sheng)細胞毒(du)性，但我們推(tui)薦0.5%。

也有(you)5%DMSO成功地應(ying)用于某(mou)些細胞(bao)的案例。

始終(zhong)保持終(zhong)濃(nong)度(du)在0.5%，但儲存時可200倍高濃度溶于100%的DMSO中(zhong)。